Česká společnost pro hmotnostní spektrometrii

(5. konference České společnosti pro hmotnostní spektrometrii - ThO-008)
HPLC ve spojení s ESI, MALDI a SALD ICP MS – detekční platforma pro charakterizaci metallothioneinů

Kateřina Jägerová ¹, Iva Benešová ^2,3, Kristýna Dlabková ², Viktor Kanický ^2,3, Jan Preisler ^2,3 *

1. Masarykova univerzita, Brno, ČR
2. Masarykova Univerzita, Brno, ČR
3. Středoevropský technologický institut – CEITEC

Abstrakt

V této práci představujeme použití nové detekční platformy, která umožnuje současné spojení konvenční LC-ESI MS s dvěma dalšími detekčními technikami: MALDI a laserová desorpce za účasti substrátu ICP MS. Jako modelový systém byl zvolen metallothionein-1 (MT-1), nízkomolekulární protein schopný vázat velké množství kovů (např. Zn, Cu, Cd, Hg).
Komplexy MT-1 s kovy byly analyzovány na koloně Vydac C8 (150 x 4.6 mm x 5 µm). Pro separaci MT-1 forem (MT-1a, MT-2d, MT-2e) byl eluát vycházející z HPLC rozdělen. Jedna část toku byla vedena přímo do ESI oTOF MS, druhá část byla nanesena ve formě 1.6 µl frakcí na plastový terčík (Prespotted AnchorChip 96). Po zaschnutí byly nanesené frakce převrstveny 0.5 µl matricí (nasycený roztok CHCA v 20% ACN (v/v), 1% TFA) s interním standardem (In). Off-line MALDI TOF a q-SALD ICP MS detekce byla provedena ze stejného terčíku.
On-line a off-line analýzou byly současně detekovány izoformy MT-1 (komplexy s kovy), apoformy (formy bez kovů) a bylo stanoveno celkové množství kovů obsažené v jednotlivých formách MT-1. Díky on-line ESI MS byly stanoveny komplexy MT-1 a jejich stechiometrie s kovy. MALDI MS poskytla přídavnou informaci o apoformách a usnadnila identifikaci forem MT-1. Pomocí SALD ICP MS bylo stanoveno přesné množství kovů a zároveň jednotlivých forem metalloproteinů.

* Korespondující autor: preisler@chemi.muni.cz

Literatura

1. Tomalová I. et al.: Anal. Chem. 8, 6448-6456 (2013).

Poděkování:

Děkujeme Grantové agentuře České republiky (GA15-05387S) a Středoevropskému technologickému institutu – CEITEC 2020 (LQ1601).